Запас глицерина - это тип суспензии, используемой в лабораторных условиях для хранения бактериальных культур в течение длительных периодов времени. Когда жидкие культуры бактерий добавляются к 50% раствору глицерина, глицерин проникает в бактериальные клетки, делая их структурно стабильными и позволяя безопасно хранить. После смешивания образцов заморозьте их при температуре –80 ° C (–112 ° F), чтобы они оставались жизнеспособными как можно дольше.
Шаги
Часть 1 из 3: Смешивание раствора глицерина
Шаг 1. Приготовьте жидкую культуру бактерий, которую вы хотите сохранить
Чтобы глицериновый бульон был эффективным, его необходимо смешивать с жидкой бактериальной культурой. Для получения жидкой культуры вам потребуется инкубировать бактериальный образец в течение ночи в колбе Эрленмейера, наполненной лизогенным бульоном и правильной концентрацией антибиотика.
- После того, как вы приготовили жидкую культуру, вы можете поместить бактерии на хранение или приступить к выделению плазмидной ДНК.
- Бульон лизогении (также известный как «бульон LB» и «жидкость LB») - это тип жидкости, богатой питательными веществами, которая используется для быстрого размножения бактерий. Его можно приобрести у продавца лабораторного оборудования и материалов.
- Инкубация бактериальных культур - это высокотехнологичный процесс, включающий множество различных переменных. По этой причине его лучше всего выполнять обученный специалист в контролируемых лабораторных условиях.
Шаг 2. Разбавьте чистый глицерин в дистиллированной воде, чтобы получить 50% раствор глицерина
С помощью стерильной пипетки отмерьте 10 мл обеих жидкостей и смешайте их в одной колбе. Тщательно перемешайте или встряхните колбу, пока жидкости не смешаются равномерно.
- Разбавление глицерина необходимо для предотвращения повреждения бактериальных клеток.
- Некоторые ученые предпочитают использовать раствор глицерина с содержанием 15-40%, чтобы избежать повреждения бактериальной культуры. Однако 50% -ная смесь обеспечит максимальный срок хранения.
Шаг 3. Перенесите 50 мкл 50% раствора глицерина в пробирку для микроцентрифугирования
Осторожно переместите разбавленный глицерин в новый флакон, чтобы не пролить его. Вы будете использовать этот же контейнер, чтобы наполнить раствор глицерина жидкой бактериальной культурой и поместить образец в холодное хранилище.
По возможности используйте тубу с завинчивающейся крышкой, а не с защелкивающейся крышкой. Известно, что пробирки с защелкивающейся крышкой случайно открываются во время смешивания и длительного хранения
Часть 2 из 3: Добавление бактериальной культуры
Шаг 1. Добавьте в раствор 50 микролитров жидкой бактериальной культуры
Используйте новую пипетку, чтобы отмерить такое же количество жидкой культуры, и вылейте ее прямо в раствор глицерина в пробирке. Конечная пропорция глицерина должна составлять 50% бактерий и 50% разбавленного глицерина.
- Использование непропорционального количества глицерина и жидкой культуры может повлиять на устойчивость бактерий и сократить время, в течение которого они могут выжить в холодных хранилищах.
- Если вы используете раствор глицерина с более низкой концентрацией, вам необходимо соответствующим образом отрегулировать количество бактериальной культуры. Для получения дополнительной информации обратитесь к литературе, относящейся к конкретному штамму, который вы храните.
Шаг 2. Закройте пробирку крышкой
Прикрутите крышку на место или надавите вниз, пока не услышите мягкий щелчок, если вы используете верхнюю трубку с защелкой. Перед тем как продолжить, убедитесь, что крышка закрыта.
Шаг 3. Осторожно встряхните пробирку, чтобы смешать бактериальную культуру и глицерин
Несколько раз взбейте пробирку вперед и назад, пока обе жидкости не распределятся равномерно. В этот момент бактериальные клетки начнут медленно поглощать раствор глицерина, который стабилизирует и защитит клеточную мембрану от разрушения и повреждений, связанных с температурой.
Во время встряхивания крепко прижмите большой палец к крышке пробирки для микроцентрифугирования, чтобы убедиться, что она не расшатывается
Часть 3 из 3: Хранение и восстановление бактериальных культур
Шаг 1. Пометьте бактериальный образец
Напишите название культуры на этикетке небольшой пробирки или полоске малярной ленты и приклейте ее к пробирке для микроцентрифугирования, где она будет хорошо видна. Вы также можете записать информацию о классификации бактерий прямо на крышку, используя фломастер.
- Не забудьте также записать любую другую информацию, которая может оказаться полезной во время анализа, например, точную деформацию образца или его происхождение.
- Маркировка контейнеров для проб - незаменимый шаг в процессе сбора, так как позволяет отслеживать их содержимое по мере того, как они перемещаются в хранилище и выходят из него.
Шаг 2. Заморозьте образец при -80 ° C (-112 ° F)
Поместите промаркированный образец в переохлажденный лабораторный морозильник, установленный на постоянную температуру –80 ° C (–112 ° F). В таких условиях бактериальная культура сохраняет жизнеспособность в течение нескольких лет.
Очень важно, чтобы температура морозильной камеры оставалась фиксированной на уровне –80 ° C (–112 ° F). Если он станет более теплым, консервированные бактерии могут погибнуть
Шаг 3. Соскоблите небольшое количество замороженных бактерий, чтобы подготовить их к анализу
Когда придет время оживить образец, извлеките пробирку для микроцентрифугирования из морозильной камеры и откройте крышку. Используйте стерильную петлю для посева, зубочистку или наконечник пипетки, чтобы собрать небольшое количество замороженного материала с верхней части образца и нанести штрихами бактерии на чашку с агаром LB для исследования или тестирования.
- Будьте осторожны, чтобы не дать бактериям соскоба оттаять. Рекомендуется держать пробирку на сухом льду до тех пор, пока вы не завершите тесты.
- Вынимайте образец из морозильной камеры только в случае крайней необходимости. Повторное оттаивание и повторное замораживание значительно сократит срок его службы.